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【干货分享】4T1 Luciferase 稳定细胞系：助力乳腺癌转移研究

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4T1 Luciferase（4T1-Luc）稳定细胞系是一种整合荧光素酶（Firefly Luciferase）报告基因的小鼠乳腺癌细胞系，源自高度转移性的4T1细胞。通过生物发光检测，4T1-Luc细胞系可实现实时、非侵入性监测肿瘤生长和转移，是乳腺癌转移机制、药物筛选和免疫治疗研究的理想工具。本指南详细阐述如何使用4T1-Luc细胞系构建乳腺癌转移模型并应用于科研课题，涵盖实验协议和优化策略。选择我们的现成4T1-Luc产品，可快速启动实验，节省构建时间！

4T1-Luc 细胞系在乳腺癌研究中的优势

4T1-Luc细胞系以其高转移特性和稳定发光信号成为乳腺癌研究的核心工具，适用于以下课题：
● 转移机制研究：模拟三阴性乳腺癌的肺、肝、骨转移，实时追踪转移动态。
● 药物筛选：高灵敏度发光信号支持高通量筛选化疗药、靶向药或纳米药物。
● 免疫治疗研究：结合CAR-T或PD-1抑制剂，评估肿瘤免疫微环境变化。
● 基因功能验证：可进一步敲除/过表达基因（如CRISPR编辑E-cadherin），研究EMT通路。
● 体内外模型：支持小鼠原位移植模型，非侵入性IVIS成像减少动物使用。

产品推荐

我们的4T1-Luc细胞系完美匹配这些课题，纯度>99%，活性高，批量订购享折扣！

荧光素酶检测结果：

样品	复孔1	复孔2	复孔3	均值	表达倍数
WT	1550	2368	4094	2671	42
LUC	107153	113540	112395	111029	42

产品优势：

● 纯度>99%，活性>1.2×10^6 RLU/10^5细胞（n=3，SD<5%）。

● 传代稳定性>20代，转移效率>80%（IVIS验证）。

● 附带COA和SOP，批量订购享折扣。

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4T1-Luc 细胞系的构建方法
构建原理

4T1-Luc 细胞系的构建基于基因工程技术，将荧光素酶基因（luc）插入载体中，转染入亲本细胞，实现稳定表达。荧光素酶催化底物荧光素（luciferin）氧化产生生物荧光（波长约 550-570 nm），发光强度与酶表达水平线性相关。常见类型包括单 Luc 系统或双 Luc 系统（结合海肾荧光素酶作为内参，以标准化实验结果）。

常见构建方法

最常用的方法是慢病毒转染，因为它能实现高效、稳定整合。以下是典型步骤（以太阳集团城9661基因公司的 4T1-Luc 细胞系构建为例）：

1. 构建表达载体：

a. 将 luc 基因（编码荧光素酶）克隆到慢病毒载体（如 pLenti 或 pLVX）中。
b. 载体通常包含启动子（如 CMV 启动子）驱动 luc 表达、抗性基因（如嘌呤霉素抗性）用于筛选，以及荧光标记（如 GFP）用于可视化。
c. 对于双 Luc 系统，可将海肾荧光素酶（Renilla Luciferase）作为内参基因，共表达或置于同一质粒上（如 pGL3 或 pmirGLO）。

2. 病毒包装：

a. 将重组载体与辅助质粒（包装质粒如 psPAX2 和包膜质粒如 pMD2.G）共转染 HEK293T 细胞，产生慢病毒颗粒。
b. 收获病毒上清，过滤并测定滴度（通常 10^8-10^9 TU/mL）。

3. 转染亲本细胞：

a. 选择亲本细胞（4T1 小鼠乳腺癌细胞），培养至 70-80% 汇合度。
b. 以 MOI（感染复数）值为 10-50 添加病毒颗粒，转染 48-72 小时。
c. 转染效率可通过 GFP 荧光或初步荧光素酶活性检测评估。

4. 筛选稳定克隆：

a. 转染后 24-48 小时，加入抗生素（如 2-5 μg/mL 嘌呤霉素）筛选阳性细胞。
b. 持续筛选 7-14 天，直至存活细胞形成单克隆。
c. 太阳集团城9661基因使用3D单细胞打印技术分离单克隆。

（3D单细胞打印技术可将单个细胞精确地分离，可以大大提高单克隆筛选的准确率和细胞存活率。3D单细胞打印技术采用非接触性操作，避免了机械损伤和背景污染的问题，有助于维持细胞的完整性和生物活性。3D单细胞打印技术可以避免传统的有限稀释法分单克隆时的人为误差，保证筛选结果的可靠性。）

5. 验证与应用：

a. 验证方法：通过 qPCR 检测基因整合、Western Blot 检测蛋白表达，或荧光素酶检测测定活性。
b. 验证标准：荧光素酶活性 > 10^6 RLU/10^5 细胞，表达稳定传代 > 20 代。
c. 应用：注射至小鼠模型中，腹腔注射荧光素底物后使用 IVIS 成像系统监测肿瘤生长。

应用示例：推进科研课题

4.1 乳腺癌转移机制

● 目标：研究Wnt信号通路在肺转移中的作用。
● 方法：敲除β-catenin基因，注射4T1-Luc，IVIS监测转移变化。
● 结果：发光信号量化转移率，支撑机制解析。

4.2 药物筛选

● 目标：筛选新型PI3K抑制剂对乳腺癌的抑制。
● 方法：体外高通量筛选，检测发光信号。
● 结果：快速生成IC50曲线，支持论文发表。

4.3 免疫治疗

● 目标：评估PD-L1抑制剂联合纳米载体的疗效。
● 方法：小鼠模型中联合治疗，IVIS监测肿瘤负荷。
● 结果：动态数据支持转化研究。

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  结论
- 4T1-Luc稳定细胞系是构建乳腺癌转移模型的强大工具，支持实时监测肿瘤进展、药物筛选和免疫治疗研究。通过高灵敏度生物发光，用户可获得可靠数据，加速论文发表和项目进展。实验室自建耗时长，而我们的4T1-Luc产品已优化表达（>90%阳性率）和转移效率，附带COA和SOP。立即订购我们的4T1-Luc细胞系，开启您的突破性研究！
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  参考文献

1. Tiscornia, G., et al. (2006). Nature Protocols, 1(1), 241–245. DOI: 10.1038/nprot.2006.37.
2. Pulaski, B. A., & Ostrand-Rosenberg, S. (2001). Mouse 4T1 breast tumor model. Current Protocols in Immunology. DOI: 10.1002/0471142735.im2002s39.
3. Kim, J. B., et al. (2004). Non-invasive monitoring of tumor growth with bioluminescence imaging. Cancer Research. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-04-1234.